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旋转蒸发仪对硫苷的纯化及浓缩

[导读]利用郑州长城科工贸有限公司的旋转蒸发仪对硫苷的纯化、浓缩。

1、 硫苷的提取

硫苷的提取剂为70%的甲醇溶液。 由于分离后的上层清液中含有大量甲醇,所以采用郑州长城科工贸有限公司真空旋转蒸发仪法去除。 将种子与叶片分离后的上层清液分别倒入蒸发瓶内,打开冷凝装置的进水阀门并开启真空泵,同时蒸发仪的条件设置为100r/min ,温度为50℃ 。当冷凝过程中,甲醇溶液不在滴落,即结束蒸发。整个蒸发过程大概需要150min ,蒸发后的溶液为深绿色油状物质即硫苷的粗提取物,最后将硫苷的粗提物置于冰箱内低温保鲜。

2 质谱检测

选取相同条件提取的种子与叶片粗提物, 再一次离心分离,并取上层清液进行真空抽滤,再通过质谱仪进行检测,检测条件为:流动相为乙腈:水=20:80;色谱柱:反相C18柱;离子极性:负离子;检测波长:229nm。

3 旋转蒸发仪对硫苷的纯化、浓缩

取粗提物倒入DEAESephadex A-25葡聚糖凝胶离子交换柱中,当粗提物流尽时,用40mL0.02mol/L醋酸钠溶液洗涤,然后用40mL水冲洗。最后以40mL0.5mol/L硫酸钾溶液洗脱,收集到的液体通过色谱仪分析纯化,要求为:流动相为乙腈:水 =20:80;检测波长:229nm ;色谱柱:反相C18(4.6mm×150mm)分析柱;流速:1mL/min 。 找出与质谱图相同的硫苷峰,在反相C18(10mm×250mm)制备柱,流速3mL/min的条件下多次收集该时间段的硫苷峰, 将收集到的溶液盛装在锥形瓶内并于冰箱内冷冻。开启真空冷冻干燥机, 将盛装样品的锥形瓶置于干机罩内,当屏幕显示 -25℃时开启真空泵。干燥时间大概3~5d,当锥形瓶内无液体,出现结晶时干燥结束,此结晶即为样品浓缩后的硫苷纯品。


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